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細胞增殖及毒性檢測試劑盒(CCK-8)
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產品問答
CCK-8兩個波長都要測嗎? 需要怎樣計算?
只測450nm下的OD值,細胞存活率 = [(As - Ab)/(Ac - Ab)] ×100% 抑制率 = [(Ac - As)/(Ac - Ab)] ×100% As:實驗孔(含有細胞的培養基、CCK-8、待測藥物)的吸光度 Ac:對照孔(含有細胞的培養基、CCK-8、沒有待測藥物)的吸光度 Ab:空白孔(不含細胞和待測藥物的培養基、CCK-8)的吸光度
每次測定的數值不一樣,是什么原因?如何解決?
可能會有以下幾個原因: 1)當在培養箱內培養時,培養板最外一圈的孔最容易干燥揮發,由于體積不準確而增加誤差。一般情況下,最外一圈的孔只加培養基,不作為測定孔用。 2)有可能會因為CCK-8沾在壁上而產生誤差,建議在加入CCK-8后,輕輕敲擊培養板以幫助混勻。 3)每孔的細胞數量過多或過少。請預先在1,000~100,000個/孔范圍內摸索條件。 4) 重復試驗請保證孵育時間、接種細胞數相同。
CCK-8會導致細胞死亡嗎?
CCK-8本身對細胞毒性特別小,作用時間長不會導致細胞都死亡,但是細胞長滿了,本身代謝會引起細胞死亡
CCK-8除了用酶標儀還可以用什么儀器?紫外分光光度計行么?
一般cck都是用酶標儀,紫外分光光度計最好不用,因為紫外我沒記錯一次只能測一個孔吧,而且還得把孔內液體吸出來到紫外用的皿里,而且檢測時間很長,CCK-8對孵育時間敏感,這樣誤差太大了
OD值偏高?
可以確認下培養時間,一般肉眼可見顏色變化即可檢測
做CCK-8經常有氣泡,對吸光度有影響,有什么辦法去除么?
有氣泡,沒辦法去除,但是可以避免有氣泡,加藥什么的槍頭抵著孔壁,慢點加液體,基本不會產生氣泡
細胞能一邊培養一邊檢測?
培養一段時間測CCK-8,然后換液后可以接著養。
反映時間怎么確定?數值必須是1么?
0.1-2.5都可以,最佳是1.0左右
如何設定空白對照
在不含細胞的培養基中加入CCK-8,培養一定的時間,測定450 nm的吸光度即為空白對照。在做加藥實驗(細胞毒性實驗)時,還應考慮藥物的吸收,可在不含細胞,加入藥物的培養基中加入CCK-8,培養一定的時間,測定450 nm的吸光度作為空白對照。
鋪板細胞量有什么要求嗎?
96孔板細胞計數的時候一般是10的4次方,我們鋪96孔板,細胞濃度是5*10的4次方,取100ul鋪板;可以您自己對細胞計數,保證每孔細胞數量一致。或者可以計數,方法:按不同細胞數鋪板,貼壁后加CCK-8,孵育1小時,然后檢測,OD值在1.5左右是最佳鋪板數
哪些物質會影響CCK-8的測定?
當有氧化還原性物質存在時會影響CCK-8的測定,因此當所加藥物為氧化還原性物質時需要換液再進行檢測。
CCK-8對于不同的細胞,靈敏度是否一樣?
不一樣,懸浮細胞與貼壁細胞相比較難顯色。對于貼壁細胞,一般加入CCK-8培養0.5-4小時吸光度已經很高,但對于懸浮細胞則可能吸光度較低,可以通過延長CCK-8的加入時間或增加細胞數量來解決。
產品簡介
產品參數
質檢證書
產品圖譜
摩爾濃度計算器
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Cell Counting Kit-8(簡稱CCK-8),是一種基于WST-8而廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性的快速、高靈敏度檢測的試劑盒。 

CCK-8試劑中含有WST-8(化學名:2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽)是一種類似于MTT的化合物,它在電子耦合試劑1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯(1-Methoxy PMS)存在條件下,可以被線粒體內的脫氫酶還原為具有高度水溶性的橙黃色甲瓚產物Formazan (參考圖1),生成的Formazan數量與活細胞的數量成正比。因此可利用這一特性直接進行細胞增殖和毒性分析,細胞增殖越多越快,則顏色越深;細胞毒性越大,則顏色越淺。

WST-8與以往的增殖/毒性測定試劑相比,具有明顯優點(參考表1)。美侖CCK-8試劑盒具有靈敏度高、反應時間短、線性范圍寬、數據可靠、重現性好等特點,可以廣泛應用于藥物篩選、細胞增殖測定、細胞毒性測定、腫瘤藥敏試驗。


1. 增殖/毒性測定試劑的比較

檢測方法

MTT法

XTT法

WST-1法

CCK-8法

甲瓚產物的水溶性

差(需加有機溶劑溶解)

檢測靈敏度

很高

很高

最高

檢測時間

較長

較短

較短

最短

檢測波長

560-600nm

420-480nm

420-480nm

430-490nm

細胞毒性

高,細胞形態完全消失

很低,細胞形態不變

很低,細胞形態不變

很低,細胞形態不變

試劑穩定性

一般

較差

一般

很好

批量樣品檢測

可以

非常適合

非常適合

非常適合

便捷程度

一般

便捷

便捷

非常便捷


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英文名字:Cell Counting Kit-8
質量標準:Meilunbio
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摩爾濃度計算器 (本計算器可幫助您計算出特定溶液中溶質的質量、溶液濃度和體積之間的關系)
摩爾濃度計算公式:質量 (g) = 濃度 (mol/L) x 體積 (L) x 分子量 (g/mol)
質量(g
=
濃度 (mol/L)
x
體積 (L)
x
分子量 (g/mol)
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